基本信息
- 项目名称：
- 用于蛋白间互作研究的双分子荧光互补（BiFC）操作平台的构建及应用
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作A类
- 简介：
- 双分子荧光互补是利用绿色荧光蛋白产生的荧光验证蛋白之间的互作、检测其互作强弱以及定位蛋白互作位点的一项新技术.本研究针对已有的BiFC载体缺陷进行改造. 同时，将应用改造后载体平台对番茄CIPKs和CBLs蛋白互作展开研究，结果番茄中CBLs与CIPKs的互作并非与拟南芥完全相同，可能调控不同的抗逆反应，为进一步开展番茄CBLs与CIPKs的功能研究提供线索.
- 详细介绍：
- 双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation，BiFC）是利用绿色荧光蛋白产生的荧光验证蛋白之间的互作、检测其互作强弱以及定位蛋白互作位点的一项新技术. 本研究针对已有的BiFC载体构建过程复杂、所用工具酶为稀有酶及连接困难等问题，对BiFC进行改造. 结果表明，改造后的BiFC平台操作便利、快捷，假阳性出现机率低，可用于蛋白间...(查看更多)
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作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 研究目的：本研究旨在扩展双分子荧光互补（BiFC）技术在植物分子生物学研究中的应用。 基本思路：分别克隆35S 启动子和终止子，插入到pCAMBIA1301双元表达载体合适位置，构建pCAMBIA1301-35ST载体；消除pCAMBIA1301-35ST载体中的部分酶切位点；分别以BiFC载体pSAT1-cEYFP-C1-B和pSAT4-nEYFP-C1质粒为模板，克隆相应的c...(查看更多)
科学性、先进性
- 蛋白质功能的表现通常通过蛋白质的相互作用完成，即某一个蛋白质的功能表型，要通过与其他蛋白质之间的相互作用来实现。蛋白互作是细胞中的一项基本生理作用，发生在所有亚细胞结构及细胞器中的每一个生理过程。目前，蛋白互作的研究已经是研究生命活动的一个热点方向。免疫共沉淀、表面等离子共振，以及酵母双杂交技术是较为传统的蛋白质互作研究手段，但不能有效开展活体研究。 利用荧光蛋白发光原理可有效检...(查看更多)
获奖情况及鉴定结果
- 1. 本项目曾在2010 年参加由浙江省大学生科技竞赛委员会主办的浙江省第二届大学生生命 科学竞赛，并获得一等奖。 2. 省科技厅2010 年度浙江省大学生科技创新活动计划立项项目“双分子荧光互补技术研究番 茄CBL1 与CIPK23 的互作”（2010R404005）。 3. 本项目曾获浙江师范大学第四届“挑战杯”课外学术科技作品竞赛一等奖。
作品所处阶段
- 实验室阶段
技术转让方式
- 有偿转让
作品可展示的形式
- 图片 样品
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 蛋白互作是细胞中的一项基本生理作用，发生在所有亚细胞结构及细胞器中的每一个生 理过程。阐明蛋白质的相互作用在何时、何地发生以及蛋白质复合物如何形成，能为确定蛋 白质生物学作用提供决定性线索。目前，蛋白互作的研究已经是研究生命活动的一个热点方 向。 BiFC 技术是近年来发展的研究目标蛋白是否具有相互作用的一项新技术。与常用的研究 蛋白互作的免疫共沉淀、表面等离子共振、酵母双杂交技...(查看更多)
同类课题研究水平概述
- 下村修等从水母体内分离纯化得到绿色荧光蛋白，马丁·查尔菲等首次在大肠杆菌中成功表达了能够产生绿色荧光的GFP。 目前，GFP的应用已经涉及分子生物学、细胞生物学以及临床医学等多个学科。作为报告基因，GFP被广泛的应用于亚细胞定位、蛋白互作等诸多体系中，成为重要的研究手段。而蛋白互作是细胞中的一项基本生理作用，利用GFP发光原理可有效检测蛋白在活体内的互作，现有双分子荧光蛋白互补和...(查看更多)
