基本信息
- 项目名称：
- SOE PCR重构SLA-I复合体的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 作品介绍了一种利用SOE PCR方法在体外重构SLA-I复合体的研究。猪SLA-I类分子在体内由重链和轻链以非共价键构成。本研究拟在体外将SLA-I重链基因SLA-2和轻链基因β2m重构，并在pMAL-p2X系统上表达。结果显示，利用SOE PCR技术成功构建了复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m，并在pMAL-p2X系统成功表达。本研究为今后在体外进行相关基因重组表达提供参考。
- 详细介绍：
- 猪的SLA-I类分子由重链由重链分子和轻链β2m构成。猪SLA-I重链有3个功能基因座，分别称为SLA-1 (PD1)，SLA-2 (PD14)和SLA-3 (PD7)。而轻链只有β2m基因编码，在体内与重链以非共价键结合，并起到支持和稳定重链结合抗原多肽表位的作用。如何在体外研究猪SLA-I重链，轻链和多肽表位的结合是一个值得探讨的问题。为此，需要在体外重构SLA-I类分子复合...(查看更多)
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 作品目的：研究SOE PCR的条件；构建猪SLA-I复合体并进行表达 基本思路：利用SOE PCR技术，中间加一富含甘氨酸/丝氨酸的linker (G4S)3，将SLA-I重链基因SLA-2和轻链基因β2m连接，形成复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m，然后将复合体基因链克隆入p2X表达质粒，导入受体菌TB1并进行表达。
科学性、先进性及独特之处
- 本作品利用SOE PCR技术将SLA-2重链基因和β2m轻链基因中间通过柔性接头Linker在体外进行重组，并对其SOE PCR条件进行优化，最后成功在pMAL-p2X系统表达，实现了两个基因的重组和表达。该作品的研究方法具有明显的科学性，其研究技术手段目前对于两个相关功能基因相互作用规律的研究仍然具有重要的参考价值。
应用价值和现实意义
- 本研究一方面在体外通过SOE PCR技术构建了猪SLA-I类的复合体，为今后进行SLA-I体外多肽结合等功能研究奠定了基础，另一方面也对SOE PCR的扩增有关条件进行了优化，为今后进行其他相关基因的研究提供了新的数据。
学术论文摘要
- 利用SOE PCR技术，中间加一富含甘氨酸/丝氨酸的linker (G4S)3，将SLA-I重链基因SLA-2和轻链基因β2m连接，形成复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m，然后将复合体基因链克隆入p2X表达质粒，导入受体菌TB1并进行表达。结果显示，利用SOE PCR技术成功得到了复合体基因链SLA-2-(G4S)3-β2m，并且克隆入p2X载体。SDS-PAGE检测表...(查看更多)
获奖情况
- 作品：SOE PCR重构SLA-I复合体的研究.在2010年09月31日发表于全国中文核心期刊《动物医学进展》2010,31（9）:58-62
鉴定结果
- 经大连大学团委和素质教育基地等有关部门鉴定，论文发表情况属实。在2010年09月31日发表于全国中文核心期刊《动物医学进展》2010,31（9）:58-62
参考文献
- [1] Horton R, Hunt H, Ho SN, Pullen JK, Pease LR. Engineering hybrid genes without the use of restriction enzymes: gene splicing by overlap extension[J]. Gene, 1989;77(1):61-8. [2] Mullis K, ...(查看更多)
同类课题研究水平概述
- SOE PCR可以把两个相关的基因通过一个富含甘氨酸/丝氨酸的Linker (G4S)3连接在一起，从而可以非常方便的研究两个相关基因之间的作用和功能。该Linker中，甘氨酸是最简单的氨基酸，由于甘氨酸缺少侧链（只有一个H），因此β转角中能很好调整其它残基的空间，不易产生碰撞，可用于调节β片层的扭曲和曲度，基本上不影响β折叠片的结构；丝氨酸则常出现在转角或无序结构。二者组成的接...(查看更多)
